声明：百科词条人人可编辑，词条创建和修改均免费，绝不存在官方及代理商付费代编，请勿上当受骗。详情>> 构建的shRNA真核表达载体或者mirshRNA真核表达载体，由于载体上均带有LR同源重组臂，所以这些载体均可作为YRBIO腺病毒包装系统中的穿梭载体使用。如果目的细胞质粒转染效率较低，则可直接以这些载体为基础包装腺病毒，利用腺病毒感染目的细胞。 YRBIO-shRNA表达系统作为RNA干扰实验的第一步，靶位点的选择，以及相应的shRNA表达载体构建，是整个RNA干扰实验的重中之重。靶位点选择恰当，shRNA干扰效率高，整个RNA干扰实验就能够事半功倍，否则，就会做许多无用功。shRNA表达载体构建后均可作为YRBIO腺病毒包装系统中的穿梭载体使用。如果目的细胞质粒转染效率较低，则可直接以这些载体为基础包装腺病毒，利用腺病毒感染目的细胞。有许多免费软件或网站能够提供靶位点选择及shRNA序列设计，但是这种免费软件算法落后，设计出的shRNA序列有效率只有25%~30%左右。与之相对应的，是一些商业化软件，或者现成的商业化shRNA库，由于其算法先进，设计原则合理，其提供的shRNA序列的有效率通常能达到75%以上，亦即可以达到每四条shRNA有三条有效。 基于以上，YRBIO系统在国内率先引进代表RNA干扰领域全球顶尖水准的TRC（The RNAi，RNA干扰协会）开发的TRC shRNA库。该库针对人、小鼠、大鼠等数万个基因，每个基因提供3~5条shRNA（已构建至载体上），总数达五万多条，且数量还在不断增加。经过大规模实验验证，其中超过75%均为有效shRNA，其干扰效率均大于70%（大多数超过80%）。以此shRNA库为基础，针对每个基因，可提供3~5条高质量的shRNA序列，并且构建到shRNA真核表达载体上。由于此数据库中的shRNA序列有效性超过75%，亦即理论上来说，每一套shRNA克隆中，必定至少有一条shRNA的干扰效率超过70%。右图1为携带绿色荧光的shRNA真核表达载体pYr-1.1-hU6-EGFP质粒图谱 (attL1和attL2为腺病毒重组位点）。只需事先了解需要干扰的目的基因，我们就会为您从数据库中调取相应的shRNA序列信息，然后，您可以选择合适的shRNA表达系统来表达shRNA，进行RNA干扰实验。选择需要干扰的目的基因，从数据库中调取相应的shRNA序列信息，然后，选择合适的shRNA表达系统来表达shRNA。YRBIO系统提供的shRNA真核表达载体，共有hU6、mU6、hH1、h7SK等四种polIII型启动子可供选择，可选择携带荧光（包括绿色荧光、红色荧光）或不携带荧光。除此之外，还提供mirshRNA真核表达载体，可以进行mirshRNA真核表达载体构建。利用腺病毒的高感染效率、高表达效率，更好地进行RNA干扰研究实验！既可以用来当普通的shRNA真核表达载体用，同时又是穿梭载体，可以拿来包装腺病毒，而且其干扰有效性、干扰效率大部分都超过 80%！ 选用YRBIO-shRNA表达系统，具有如下优点：（1）shRNA序列数据依然来自国外成熟shRNA数据库，质量有保证。RNA干扰效率的高低主要取决于靶位点的选择、shRNA序列的设计，而由于YRBIO所采用的shRNA序列来自国外成熟shRNA数据库，算法先进，靶位点成功率高，所以shRNA的干扰成功率非常高。（2）您可以选择构建一条或者多条，灵活度高。（3）多种启动子，有荧光或无荧光，绿色荧光或红色荧光等可自由选择，以更好地配合后续实验。（4）载体可作为普通shRNA表达载体使用，亦可作为腺病毒包装系统的穿梭载体使用，以进行腺病毒包装。右图2为不携带荧光的shRNA真核表达载体pYr-2.1-hU6质粒图谱(attL1和attL2为腺病毒重组位点)。 shRNA真核表达载体构建表达系统匹配 编辑 语音 此shRNA数据库亦有一套原装进口的shRNA表达系统相匹配，针对每个基因的一套shRNA序列均已构建至相应的shRNA表达载体上，可直接使用,整套产品均为原装进口。此系统中，装载shRNA序列的真核表达载体，同时也是YRBIO第三代慢病毒包装系统中的穿梭载体。也就是说，如果目的细胞质粒转染效率较低，那么只需相应的慢病毒包装系统中的包装质粒、转染试剂、293T包装细胞，便可以将这些shRNA包装慢病毒，利用慢病毒的高感染效率、高表达效率、长期表达特性，更好地进行RNA干扰研究实验！ 右图3为shRNA真核表达载体pYrbio-LT-1质粒图谱选用原装进口shRNA表达系统，具有：优点：（1）原装进口产品，未做任何改动。（2）装载shRNA序列的真核表达载体，同时也是慢病毒包装系统中的穿梭载体，可用以包装慢病毒。缺点：（1）载体上没有荧光标记。（2）载体骨架稍微有点大，有7K左右。 shRNA真核表达载体构建TRC 编辑 语音 TRC（The RNAi，RNA干扰联盟）是由麻省理工学院和Harvard牵头建立的合作机构，包括Massachusetts General Hospital、Harvard Med school、Dana Farber Cancer Inst、The Broad Institute、Whitehead Institute、MIT、Academica Sinica (Taiwan)和另外5个国际性组织，代表着RNA干扰领域的全球最顶尖水平。该组织计划在3年内构建数量达15,000个人类基因和15,000个小鼠基因的shRNA文库。第1版的TRC shRNA文库包括35,000 shRNA克隆（其中人类基因有5300个，小鼠基因有2200个），其它新构建的克隆每个季度会陆续公布。